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鉴别试验：
⑴钾、钠盐的火焰反应⑵呈色反应①羟肟酸铁反应：青霉素及头孢菌素在碱性中与羟胺作用，β-内酰胺环破裂生成羟肟酸，在稀酸中与高铁离子呈色。
头孢哌酮：红棕色；氨苄西林：紫红色；头孢氨苄：红褐～褐色；头孢噻吩钠：红褐色；普鲁卡因青霉素：紫红色；头孢唑啉钠：红棕色。
②硫酸-硝酸呈色反应：头孢菌素能与硫酸-硝酸反应后成色。
头孢噻吩钠：红棕色；头孢氨苄：黄色；头孢噻肟钠：亮黄色。
③茚三酮反应：某些具有α-氨基的本类药物（如氨苄西林）遇茚三酮即显蓝紫色。
④与斐林试剂反应：本类药物具有类似肽键结构，可产生双缩脲反应。开环分解，使碱性酒石酸铜盐还原显紫色。阿莫西林、氨苄西林钠可采用本法鉴别。
⑤变色酸-硫酸呈色反应：阿莫西林加变色酸-硫酸实际混合后，于150℃加热2～3min，因分解除甲醛与变色酸缩合而呈深褐色。
⑥与重氮苯磺酸呈色反应：头孢菌素族7位侧链含有酚羟基基团时，能与重氮苯磺酸试液产生偶合反应，显橙黄色。
⑦与铜盐呈色：头孢氨苄加醋酸、硫酸铜、氢氧化钠试液后，生成铜配位盐，显橄榄绿色。
⑶沉淀反应①在稀酸中生成白色沉淀：青霉素钾和青霉素钠加水溶解后，加稀盐酸2滴，即析出难溶于水的游离基白色沉淀。此沉淀能在乙醇、醋酸戊酯、氯仿、乙醚或过量的盐酸中成盐。
②有机胺盐的特殊反应重氮化-偶合反应：普鲁卡因青霉素水溶液酸化后，显普鲁卡因芳伯氨基的重氮化-偶合反应，生成偶氮染料红色沉淀。
与三硝基苯酚的反应：苄星青霉素经氢氧化钠碱化后，用乙醚提取，蒸去乙醚后的残渣含有二苄基乙二胺，加稀乙醇使残渣溶解，加三硝基苯酚的饱和溶液，加热后放冷，即析出二苄基乙二胺苦味酸结晶。
⑷光谱法①紫外分光光度法最大吸收波长鉴定法水解产物的最大吸收波长鉴定法②红外吸收光谱③核磁共振光谱⑸色谱法①薄层色谱法②高效液相色谱法含量测定⑴碘量法（苄星青霉素）
青霉素或头孢菌素分子不消耗碘，其降解产物消耗碘。
反应分两步进行：第一步反应是按化学计算量进行；第二步青霉噻唑烷酸在酸性条件下被碘氧化的反应受温度、pH、时间等诸多因素影响，故耗碘量没有固定的量关系。因此试验过程中要严格控制温度，同时采用与青霉素标准品平行对照测定，则可抵消上述可变因素的影响。
碘与青霉噻唑酸的作用以Ph4.5，温度在24～26℃为最好。1摩尔青霉素能吸收8摩尔的碘，故本法的灵敏度较高。
注意：在滴定终点时放慢滴定速度，并强力振摇；如果滴定至终点又返现蓝色，说明真正的终点尚未到达。
⑵汞量法（青霉素钠、青霉素钾）
青霉素分子不与汞盐反应，而其碱性水解产物青霉噻唑酸及继续水解生成的青霉胺都能与汞盐定量反应，根据消耗的汞盐量可以计算青霉素的含量。
电位滴定法：指示电极：铂电极；参比电极：汞-硫酸亚汞电极。滴定液：硝酸汞。
每1ml的硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相当于7.128mg的总青霉素。
总青霉素的百分含量与降解产物的百分含量之差值即为青霉素的含量。
注意：青霉素含量计算以第二次滴定终点为依据；水解必须完全；空白试验也要称取供试品，但不经氢氧化钠水解；与碘量法比较，汞量法测定青霉素的主要优点是不需要青霉素标准品作对照，汞盐滴定液用EDTA标定即可。
⑶酸碱滴定法（苯唑西林钠）
⑷紫外-可见分光光度法⑸高效液相色谱法氨基糖苷类抗生素
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