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染色时不易着色，染色性常发生变化。革兰染色大多呈阴性。被染成红色，且着色不均匀;由于细胞壁缺陷程度不一，在同一视野中可出现阳性、阴性混杂现象，或菌体内出现革兰阳性浓染颗粒。
细菌L型生长缓慢，营养要求高，对渗透压敏感，普通培养基上不能生长，培养时必须用高渗的含血清的培养基。细菌L型在含血清的高渗低琼脂培养基(L型细菌的培养特点)中能缓慢生长，可形成三种类型的菌落：
①油煎蛋样菌落(典型L型细菌)：菌落较小，中心致密并深陷入琼脂中;四周较薄，由透明的颗粒组成，在低倍镜下观察菌落呈“油煎蛋”状。(与支原体的菌落相似)
②颗粒型菌落(简称G型菌落)：整个菌落由透明的颗粒组成，无致密的核心。
③丝状菌落(简称F型菌落)：菌落中心如典型L型菌落。但周边呈丝状。
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