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1913年Van den Bergh根据胆红素是否直接与重氮试剂反应，将其分为直接胆红素和间接胆红素。前者是经过肝细胞加工后的胆红素，其实质是由胆红素n分子与1到2个葡萄糖醛酸分子单独酯化的结构，易溶于水，可通过肾脏排泄，能直接与重氮试剂反应，后者是红细胞破坏后形成的胆红素，在循环中主要与白蛋白结合，间接胆红素不能与重氮试剂直接反应，必须有“加速剂”的参与，例如：甲醇、咖啡因等试剂，才能反应。
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