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色谱法是目前分离三萜类化合物最常用的方法,通常采用多种色谱法相组合的方法。$lesson$
①吸附柱色谱法;②分配柱色谱法;③高效液相色谱法;④大孔树脂柱色谱;⑤凝胶色谱法。
(1)吸附柱色谱法:
①常用方法,可用于分离各类三萜化合物。
②依据所用的吸附剂性质的不同,分为正相吸附柱色谱和反相吸附柱色谱。
③正相吸附柱色谱的吸附剂常用硅胶。
④反相柱色谱通常以键合相硅胶Rp-18、Rp-8或Rp-2等为填充剂。
(2)分配柱色谱法:多用于分离皂苷,常用硅胶等作为支持剂,固定相为3%草酸水溶液等,流动相为含水的混合有机溶剂:如氯仿-甲醇-水,正丁醇-水等。
(3)高效液相色谱法:是目前分离皂苷类化合物最常用的方法,分离效能较高。用于皂苷的分离制备一般采用反相色谱柱,以甲醇-水、乙腈-水等系统为洗脱剂。
(4)大孔树脂柱色谱:适用于皂苷的精制和初步分离。
操作:将含有皂苷的水溶液通过大孔树脂柱后,先用水洗涤除去糖和其他水溶性杂质,然后再用浓度由低到高的甲醇或乙醇依次进行梯度洗脱,极性大的皂苷可被l0%~30%的醇洗脱下来,极性小的皂苷则被50%以上的醇洗脱下来。
(5)凝胶色谱法:分子筛的原理来分离分子量不同的化合物,在用不同浓度的甲醇、乙醇或水等溶剂洗脱时,各成分按分子量递减顺序依次被洗脱下来。即分子量大的皂苷先被洗脱下来,分子量小的皂苷后被洗脱下来。应用较多的是在有机相中使用的Sephadex LH-20.
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