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1.切片常规脱蜡至水。如需抗原修复，可在此步后进行
2.缓冲液洗3min/2次。
3.为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色，将切片放在Hydrogen Peroxide Block中孵育10-15分钟。
4.缓冲液洗5min/2次。
5.滴加UltraVBlock，在室温下孵育5分钟以封闭非特异性的背景染色。
(注：孵育不要超过10分钟，否则会导致特异性染色降低。如果一抗的稀释液中含有5-10%正常羊血清，这一步可以省略。)
6.缓冲液洗5min/2次。
7.滴加一抗工作液37℃孵育1-2小时。(具体孵育时间和温度由试验者最终决定)
8.缓冲液洗5min/2次。
9.滴加Primary Antibody Enhancer(增强子)，在室温下孵育20分钟。
10.缓冲液洗5min/2次。
11.滴加HRPPolymer(酶标二抗)，在室温下孵育30分钟。
(注：HRPPolymer对光敏感，应避免不必要的光暴露并储存在不透明的小瓶中。)
12.缓冲液洗5min/2次。
13.向1mlDAB Plus Substrate中滴加1-2滴DAB Plus Chromogen，混匀后滴加到切片上，孵育3-15分钟。(具体时间由染色深浅决定。) 14.自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。