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初级检验技士辅导：立克次体及检验(4)$lesson$
微生物检验
(一)标本的采集和处理(熟悉)
1、病人血液标本：发热初期或急性期交易检出病原体。在病程第1周内并在用抗生素前采血，立即床侧接种。
血清学检查一般采集3份血液标本，分别取自病程早期、病后10-14天及病后21-28天。如患者已使用抗生素治疗，因抗体产生较晚，需采集4份标本。
2、活检或尸体材料：肺、肝、脾等组织标本研磨制成悬液，离心取上清液接种，有细菌污染时加青霉素置室温作用30分钟后街终于动物。
(二)标本直接检查(熟悉)
1、立克次体的染色法：多用于脏器标本的检查。固定后用荧光抗体染色或常规染色镜检。必要时做切片检查，标本片薄而均匀，组织结构清晰，常见脾、肺及心瓣膜中有立克次体，也可在肝、肾及皮疹活检组织中检出。
2、核酸检测：针对特异性抗原基因的序列设计引物，采用PCR技术和核酸探针检测。
(三)立克次体培养法(熟悉)
1、立克次体分离：班疹伤寒、斑点热、恙虫病和Q热病原体分离多用动物接种。常用动物有豚鼠、金黄地鼠、小白鼠、大白鼠及家兔等。汉赛巴通体用人工培养基，埃立克体用细胞培养。
2、分离株的大量繁殖及保存用鸡胚卵黄囊培养或细胞培养。
(四)血清学试验(掌握)
血清学试验是研究立克次体的重要方法，也是立克次体病实验诊断和鉴定病原体的重要手段。患者双份血清的试验结果，有利于立克次体病现症诊断。
1、间接免疫荧光试验、ELISA间接法：是目前检测标本中特异性抗体的常用方法。
单份血清滴度≥1：128者有现症诊断意义，一般滴度在1：16或以上即为阳性，4倍增长可作为立克次体病的现症诊断。
补体结合试验虽特异，但敏感性不如间接免疫荧光和ELISA，且操作繁琐，除Q热诊断外，多被前两者取代。
2、凝集试验：分为特异性凝集和非特异性凝集试验两种。
(1)特异性凝集试验：微量凝集(MA)试验、间接血凝(IHA)、胶乳凝集(LA)试验
MA以血清最高稀释度呈凝集者为其滴度，达1：8以上者为阳性。IHA滴度在1：50以上有诊断价值。LA结果与IHA结果相吻合。
(2)非特异性凝集试验：
外斐试验常用于立克次体属的三个生物型的诊断，缺乏敏感性和特异性。本试验除Q热、立克次体痘及汉赛巴通体感染为阴性外，其他为阳性结果。
一般血清滴度达1：160即为阳性，病程中双份或多份血清试验，至少效价有4倍增长才有诊断意义。