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初级检验技士辅导：衣原体的微生物检验 $lesson$
微生物检验
1、标本采集与处理
(1)沙眼衣原体：
沙眼和包涵体结膜炎病人，用拭子在结膜上穹窿部涂擦或睑结膜病灶刮片。
子宫颈炎取子宫颈刮片上皮细胞或分泌物做涂片。
性病淋巴肉芽肿患者，可采取腹股沟淋巴结脓汁，也可取直肠拭子或活检材料送检。
(2)鹦鹉热衣原体
采集患者血液、痰液或咽喉含漱液。尸体材料取肝、脾、肺等组织，也可采腹腔和心包渗液。
(3)肺炎衣原体
一般利用拭子经鼻前庭插入鼻腔咽部，旋转后取出，利用转运培养基冷藏送检。也可采集气管内痰液或肺泡灌洗液。
2、直接显微镜检查
染色镜检，寻找上皮细胞胞质内的包涵体。包涵体指在易感细胞内含增殖的始体和子代原体的空泡。根据包涵体的形态、在细胞内的位置及染色性等特征，对鉴别衣原体有意义。
(1)吉姆萨染色：原体呈紫红色，始体呈蓝色，包涵体呈深蓝色。
沙眼衣原体原体包涵体密度低，呈空泡形。
鹦鹉热衣原体和肺炎衣原体包涵体呈深密度的卵圆形，肺炎衣原体在HeLa细胞中的包涵体形态与鹦鹉热衣原体相似，但不像鹦鹉热衣原体具有多形性。
(2)碘液染色：
标本经甲醛固定后，用Lugol碘液染10分钟，水洗后镜检。因包涵体的基质含有丰富的糖原，可被碘液染成深褐色，而细胞的其他部分呈黄色。
沙眼衣原体含糖原，碘液染色阳性。
鹦鹉热衣原体和肺炎衣原体碘液染色阴性。
(3)可利用抗LPS单抗进行直接荧光抗体染色检测上皮细胞内的衣原体抗原。
3、酶免疫检测：
能在数小时内检测出衣原体可溶性抗原，并适用于同时检测大量标本。
4、核酸检测
按外膜蛋白(MOMP)基因序列或其他种、型特异性的核酸片断，构建特异性引物或探针，利用PCR、核酸探针技术进行检测。按16SrRNA基因序列设计引物一般具有属特异性。
5、分离培养
各种衣原体均可在鸡胚卵黄囊和组织细胞中生长繁殖，鹦鹉热衣原体常用小鼠分离。
(1)鸡胚卵黄囊接种：将检查临床标本加适当的抗生素(如链霉素、庆大霉素和制霉菌素等)处理后接种鸡胚卵黄囊分离培养，35℃孵育，观察至13天，收获卵黄囊涂片，作吉姆萨染色，镜检原体。
(2)细胞培养：目前常用的细胞有两种：即经X线照射的McCoy细胞和HeLa细胞。不同的衣原体有各自最适合的培养细胞系。
沙眼衣原体多用McCoy细胞，鹦鹉热衣原体适合HeLa229细胞系进行培养。肺炎衣原体适合用HEP-2和HL细胞系进行培养。
(3)小白鼠接种：小白鼠对不同种衣原体的敏感性不同，对沙眼衣原体不敏感，主要用于鹦鹉热衣原体的分离。用小鼠腹腔、颅内或滴鼻接种。
6、检测抗体：用补体结合试验、微量免疫荧光法、酶免法检测抗体。