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初级检验技师辅导：粪便检查免疫学方法 $lesson$
免疫学方法
为解决隐血试验的特异性问题及鉴别消化道出血部位，当前发展的最快的是免疫学方法，如免疫单扩法、对流免疫电泳、酶联免疫吸附试验、免疫斑点法、胶乳免疫化学凝聚法，放射免疫扩散法、反向间接血凝法、胶体金标记夹心免疫检验法等，此类试验所用抗体分为两大类，一种为抗人血红蛋白抗体，加一种抗人红细胞基质抗体。免疫学方法具有很好的灵敏度，一般血红蛋白为0.2mg/L,0.03mg/g粪便就可得到阳性结果，且有很高的特异性，各种动物血血红蛋白在500mg/L，辣根过氧化物酶在2000mg/L时不会出现干扰，因而不需控制饮食，据Herzog和Cameron等研究，正常人24小时胃肠道生理性失血量为0.6ml，若每日多于2ml，则属于病理性出血。由于免疫学方法的高度敏感性，又由于有正常的生理性失血，如此高的灵敏度，要在某些正常人特别是服用刺激备用肠道药物后可造成假阳性。但免疫学隐血试验主要检测下消化道的优点，目前被认为是对大肠癌普查最适用的试验，免疫学法隐血试验主要检测下消化道出血，约有40-50%的上消化道出血不能检出。原因是：①血红蛋白或红细胞经过消化酶降解已不具有原来免疫原性;②过量大出血而致反应体系中抗原过剩出现前带现象;③病人血红蛋白的抗原与单克隆抗体不配，因此有时外观为柏油样便而免疫法检查却呈阴性或弱阳性，此时需将原已稀释的粪便再稀释50-100倍重做或用化学法复检。此外免疫学的方法也从检测血红蛋白与人红细胞基质扩展到测定粪便中其它随出血而出现的带有良好的抗原性而又不易迅速降解的蛋白质、如白蛋白、转铁蛋白等，灵敏度达2mg/L。
[方法与结果] 常用化学方法有邻甲苯胺法、联苯胺法、匹拉米洞法、无色孔雀绿法、愈创木法等。邻联甲苯胺法灵敏度高，可检出消化道1～5ml的出血;联苯胺法、匹拉米洞法、无色孔雀绿法中度灵敏，可检出5～10ml的出血;愈创木法灵敏度差，出血达20ml时方出现阳性。正常人粪便隐血试验呈阴性反应。
[临床意义] 便隐血试验对消化道出血有重要诊断价值。
(1) 阳性反应:
①消化性溃疡，阳性率为40%一70%，呈间隙阳性;
②消化道恶性肿瘤，如胃癌、结肠癌，阳性率可达95%，呈持续性阳性，因此，OBT常作为消化道恶性肿瘤的诊断筛选指标;
③其他，如急性胃粘膜病变、肠结核、Crohn病、溃疡性结肠炎、钩虫病及流行性出血热等，OBT均常为阳性。
(2)假阳性反应: 进食动物血、肉类及进食大量蔬菜均可出现假阳性反应，因此在进行OBT前要求素食3天。近年来为解决OBT特异性问题和鉴别消化道出血部位建立了一些免疫学检查法，所用抗体有两种，一种为抗人血红蛋白抗体，另一种为抗人红细胞基质抗体，后者可检出下消化道出血，因上消化道出血时的红细胞或血红蛋白经消化酶降解变性己失去原来的免疫原性。免疫法隐血试验特异性高，不受动物血红蛋白干扰，因而不需控制饮食。
课堂练习：
临床判断消化道出血完全停止的最可靠实验指标结果是： C
A、粪镜检无红细胞 B、无柏油样黑便 C、粪隐血试验阴性 D、粪胆素试验阴性 E、粪胆原试验阴性