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初级检验技士:碳水化合物代谢试验(3)
β-半乳糖苷酶试验(ONPG试验)
(1)原理:有的细菌可产生β-半乳糖苷酶,能分解邻-硝基酚-β-D-半乳糖苷(ONPG),而生成黄色的邻-硝基酚,很低浓度也可以检测。
(2)方法:从克氏双糖铁培养基上取菌,于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液,加入一滴甲苯并充分混匀,使酶释放。将试管置37℃水浴5分钟,加入0.25ml ONPG试剂,水浴20分钟-3小时,观察结果。
(3)结果:菌悬液呈现黄色为阳性反应,无色为阴性。一般在20-30分钟内显色。
()应用:可用于迟缓发酵乳糖细菌的快速鉴定,本法对于迅速及迟缓分解乳糖的细菌均可短时间内呈现阳性。埃希菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、哈夫尼亚菌属、沙雷菌属和肠杆菌属等均为试验阳性,而沙门菌属、变形杆菌属和普罗威登斯菌属等为阴性。
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