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初级检验技师考试辅导：荧光抗体技术
荧光抗体技术
(1)荧光抗体的制备和鉴定
①抗体荧光素标记：用于标记抗体，要求是高特异性和高亲和力的。作为标记的荧光素应符合以下要求：
1)应具有能与蛋白质分子形成共价键的化学基团，与蛋白质结合后不易解离，而未结合的色素及其降解产物易于清除。2)荧光效率高，与蛋白质结合后，仍能保持较高的荧光效率。3)荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明。4)与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫性质。5)标记方法简单、安全无毒。6)与蛋白质的结合稳定，易于保存。常用的标记蛋白质的方法有搅拌法和透析法两种。
②荧光抗体的鉴定：包括效价及荧光素与蛋白质的结合比率。抗体效价可以用琼脂双扩散法进行滴定，效价大于1：16者较为理想。荧光素与蛋白质结合比率(F/P)来计算。F/P值越高，说明抗体分子上结合的荧光素越多，反之则越少。一般用于固定标本的荧光抗体以F/P=1.5为宜，用于活细胞染色的以F/P=2.4为宜。
(2)免疫荧光显微技术：是使荧光抗体与标本切片中组织或细胞表面的抗原进行反应，洗涤除去游离的荧光抗体后，于荧光显微镜下观察，在黑暗背景上可见明亮的特异荧光。
①标本的制作：主要靠观察切片标本上荧光抗体的染色结果作为抗原的鉴定和定位。
②荧光抗体染色：滴加经适当稀释的荧光抗体进行染色。
③荧光显微镜检查：最好在染色当天即作镜检，以防荧光消退，影响结果。
④实验的类型：包括直接法、间接法、补体结合法和双标记法。
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