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初级检验技师辅导：杂交瘤技术基本原理
杂交瘤技术基本原理
(1)基本原理：是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。这两种细胞分别是经抗原免疫的小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞。在选择培养基的作用下，只有B细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交细胞才具有持续培养的能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞克隆。
(2)B细胞杂交瘤技术
①细胞的选择和融合：杂交瘤技术的目的是制备对抗原特异性的单克隆抗体，多发性骨髓瘤是B细胞系恶性肿瘤，是理想的脾细胞融合对象。
②选择培养基的关键成分次黄嘌呤(H)、氨甲蝶呤(A)、胸腺嘧啶核苷(T)，取三者字头称HAT培养基。
③有限稀释与抗原特异性的选择：将融合细胞进行充分稀释，进行克隆化处理，再将阳性细胞进行再次克隆化，应用特异性抗原包被的ELISA找出针对目标抗原的抗体阳性细胞株进行增殖，再进行冰冻，体外培养或动物腹腔接种。
(3)T细胞杂交瘤：可分为小鼠细胞杂交瘤和人T细胞杂交瘤。是将激活的细胞与酶缺陷型淋巴瘤细胞融合，通过有限克隆稀释，获得特异性表达细胞受体(TCR)或其他功能的杂交瘤细胞。其步骤①淋巴瘤细胞系的选择;②特异性细胞的制备与活化;③T细胞杂交瘤的筛选。
(4)阳性杂交瘤细胞的克隆化培养：将阳性杂交瘤细胞进行单细胞分离培养，产生单克隆杂交瘤细胞，经2～3次检测均为阳性的杂交瘤单个细胞，才能进行克隆化培养。阳性杂交瘤细胞应保存在-196℃。
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