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初级检验技师考试辅导:抗血清的制备
抗血清的制备
(1)免疫动物的选择:
①抗原与免疫动物的种属差异越远越好。
②动物必须适龄、健壮、无感染、体重合乎要求。
③针对不同性质的免疫原,选用相应的动物。甾类激素多用家兔;酶类多用豚鼠。
④抗血清要求为R(rabbit)型或H(horse)型血清。
此外需要制备大量免疫血清时,应选用马、绵羊等大动物;若需要量不多,则选用家兔、豚鼠和鸡等。
(2)免疫方法及途径
①免疫原的注射剂量:应考虑抗原性强弱、分子量大小、动物的个体状态和免疫时间。
②免疫途径:通常有静脉、腹腔、肌肉、皮内、皮下、淋巴结及足掌等。
③免疫方案:根据设计的目的要求、抗原性质、佐剂的种类来制定免疫方案。可采用全量免疫法、微量免疫法或混合免疫法。
④抗体产生阶段:可分静止期(约2天,血中尚无抗体);指数期(约4天左右,抗体迅速上升);稳定期(约2~4周,抗体保持一个稳定水平);下降期(约几个月后,此时抗体缓慢下降)四个阶段。
(3)抗血清的鉴定和保存
1)特异性抗体的鉴定:
①抗体特异性鉴定:常采用双向免疫扩散法。
②抗体的效价的鉴定:常采用双向免疫扩散法。一是仅稀释抗血清,与同一浓度抗原反应;另一是抗血清、抗原同时稀释作棋盘滴定。
③抗体的纯度鉴定:常用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定。
2)抗血清的保存:
①是4℃保存,通常可保存3个月~半年,效价高时可保存一年左右;
②是-20℃~-40℃低温保存,可保存5年左右,但需防止反复冻融;
③种是真空冰冻干燥保存,可保存5~10年。
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