2015年自考生物制药学复习资料:支原体污染的检测方法
|0·2014-11-13 10:56:42浏览 收藏
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细胞培养过程中，支原体污染的检测方法包括
(1)培养法：将疑有支原体污染的培养物0.5mL经-20℃冻融后接种到支原体琼脂平皿上，于37℃无氧条件下培养7～4d，观察有无支原体菌落形成;
(2)荧光染色法：荧光染料用Hoechst33258，支原体内含有DNA，通过支原体DNA结合荧光染料后，在荧光显微镜下能见到发绿色荧光的小亮点。被支原体污染的细胞不仅在细胞核而且在细胞核外及细胞膜上均显示荧光;
(3)聚合酶链反应(PCR)方法：是一种快速敏感的支原体检测方法。根据常规PCR反应原理和实验步骤即可完成对培养物中支原体的快速检测，具有很高的灵敏度。可快速检测细胞培养物和生物制品、牛血清等生物材料中的支原体污染，比常规培养法和DNA间接荧光染色法快5～10d。
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