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2015主管药师考试辅导:乳糜微粒检查试剂

|0·2014-03-06 14:43:51浏览0 收藏0
摘要 乳糜微粒检查试剂是主管药师考试所涉及的内容,环球网校医学网整理如下,供广大主管药师考试考生参考学习。

  乳糜微粒检查试剂是主管药师考试所涉及的内容,环球网校医学考试网整理如下,供广大主管药师考试考生参考学习。

  (1)免疫透射比浊法:

  ①样品稀释剂:pH 7.4的磷酸盐缓冲液(0.01mol/L磷酸盐中含0.15mol/L氯化钠),内含PEG-6000 40g/L及表面活性剂适量(选用聚氧乙烯月桂醚类,如Thesit或Tween-20),用GS玻芯漏斗抽滤后用。本试剂的吸光度A340nm<0.05,在2~6℃冰箱中可存放半年。如半年后A值仍<0.05,可继续应用,如>0.05可按上述条件抽滤后再用。

  ②羊或兔抗人apoAⅠ抗血清:原血清效价以1∶32~1∶64为宜。抗血清可用含PEG-6000的磷酸盐缓冲液(不含表面活性剂)或用硫酸铵沉淀法纯化。抗血清应用液浓度因各批抗血清的效价及免疫亲和力而异(应按试剂盒说明书,临用前稀释)。抗血清中含防腐剂,在2~6℃冰箱中可存放半年。原血清(冻干)在低温冰箱中(-20℃以下)可贮存数年。

  ③参考血清:现在已有国际标准,即WHO CM参考物质SPI-01(冻干血清)。符合国际标准的校准血清由卫生部北京老年医学研究所提供。

  校准血清保存在-20℃以下,至少稳定半年,化冻后必须彻底混匀后才能应用。最好备有高、中、低浓度(例如apoAⅠ 2.0,1.3与0.6g/L左右)的校准血清各1份。便于作校准曲线。

  附注:

  ①关于抗血清:比浊测定与其他方法相比对抗血清的要求更高。比浊法以用多克隆抗体为宜。抗血清中必须不含杂抗体。必须十分重视从人血清中提取的apoA-Ⅰ达到免疫纯、色谱纯与电泳纯,这不是一般实验室都能做到的。抗血清效价(滴度)不可低于16.目前国内某些商品试剂中,apoA-Ⅰ抗血清效价极低,选购试剂盒时必须注意。如果没有在选购前鉴定抗血清质量的经验,应请有条件的单位鉴定之。

  ②上法中标本(血清)稀释200倍是为了便于手工操作(加样100μl),如有精密加样器,可作20倍稀释(用10μl)。为了适合不同实验室的条件(如不同类型的自动化仪器),作适当修改时应注意抗原抗体的比例,必须十分注意反应体系中不可有抗原过量,线性上限不可低于2.5g/L.换言之,抗血清用量必须充裕,否则标本中apoA-Ⅰ高水平时测出结果偏低。目前国内某些商品试剂盒不但抗血清效价过低,操作中所定标本用量又过大(如3~5μl),抗体明显不足,测出结果必然不准确。

  ③为了达到准确测定的目的,apoA-Ⅰ与B比浊测定(终点法)中必须作校准曲线计算结果。一定范围(低标本用量)浓度(X)与浊度(Y)基本上成直线关系,直线回归计算出在Y轴上有一定截距(A值<0.1),所以用单点校准计算结果偏差较大,使测出结果不能准确反映浓度的高低(高的偏低,低的偏高)。千万不要因为单点法简便而忽略了测定的准确性。无论用何种自动化仪器,必须先试作校准曲线。如果在所用仪器及特定条件下反复测试,回归线的截距不明显时,才能采用单点校准法。标本用量在3~5μl时,即使加大抗血清用量,浓度与浊度也不成直线关系,只能用曲线直线化转换后计算。

  ④主要干扰因素是血清本身的混浊(如高脂血清),用超离心或脂肪酶水解等标本预处理方法都不实用。用表面活性剂消浊的作用也有限,所以在测定中必须作标本空白管。除了自动分析中可采用两点法外,手工法用单一试剂而不扣除标本空白的做法是错误的。为了减少基质效应对浊度反应的影响,必须用定值血清作校准物。此外,尘埃粒子、比浊皿划痕等干扰也必须排除。

  ⑤有的商品试剂盒(包括某些进口产品)所附校准血清定值不准确,是误差的重要来源。

  (2)火箭电泳法:

  ①巴比妥缓冲液,离子强度0.05,pH8.6.

  ②10g/L琼脂糖(标准电内渗)用巴比妥缓冲液配制,加热溶化,混合后,分装10ml/管,冷后4℃贮存。

  ③0.15mol/L NaCl溶液。

  ④兔(或羊)抗人apoAⅠ抗血清(效价不低于1∶16)及apoB抗血清(效价不低于1∶32)。

  ⑤校准血清(同比浊法)。

  ⑥染色液:考马斯亮蓝R-250 0.25g溶于甲醇45ml中,加入冰醋酸10ml及水45ml,混合,溶后备用。

  ⑦脱色液:每升含冰醋酸50ml及甘油100ml.

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